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Title: Caracterização de base molecular da hiperplasia supra-renal congénita em doentes com suspeita de deficiência em 11\03B2hidroxilase
Authors: Guerreiro, Ana Maria dos Santos, 1985
Advisor: Gonçalves, João
Paulo, Octávio, 1963-
Keywords: Biologia molecular
Hiperplasia supra-renal congénita
Teses de mestrado
Issue Date: 2008
Abstract: Congenital adrenal hyperplasia (CAH), characterized by a total or partial deficit in cortisol, is due in about 90% of the cases to 21-hydroxylase deficiency and in 5-8% of the cases to 11ß-hydroxylase (11ß-OH) deficiency. Considering that a diagnosis directly associated with 11ß-OH deficiency is difficult to establish and a screening of this disease has never been done in the Portuguese patients, the aim of this project was to characterize the molecular basis of CAH in patients with suspected 11ß-OH deficiency. For this purpose, genomic DNA was obtained from peripheral blood samples of patients with CAH possibly due to 11ß-OH deficiency. The molecular analysis of CYP11B1 gene was based on PCR, DHPLC and automatic sequencing of the DNA samples from the patients under study. Molecular alterations were searched in the coding region as well as in the promoter of CYP11B1, including Ad1, Ad4 and Ad5 sites as well as two single nucleotide polymorphisms (SNPs), -1889G>T and -1859A>G. It was also designed a molecular test to enable the detection of chimeras resulting from unequal crossing-over between CYP11B2 and CYP11B1 genes. Changes were found either in the coding regions as in the intronic regions. All of the changes were point mutations, some of them were silent mutations, others were intronic mutations (two of them with possible effect on splicing IVS8+126C>G and IVS8+213T>C), two were missense mutations (p.Arg43Gln and p.Val378Met) and another one was a nonsense mutation (p.Gln356X). With regard to the promoter region, no changes were found at Ad1, Ad4 and Ad5 sites. The SNP's at the positions -1889 and -1859 were, in all samples, the ones that are not associated to the disease
A hiperplasia supra-renal congénita (CAH) deve-se a um défice, total ou parcial, em cortisol. Cerca de 90% dos casos resultam de deficiência em 21-hidroxilase e cerca de 5-8% dos casos a deficiência em 11ß-hidroxilase (11ß-OH). Pelo facto de a nível clínico ser difícil estabelecer um diagnóstico preciso associado à deficiência em 11ß-OH e por nunca ter sido efectuado qualquer rastreio desta doença em doentes portugueses, o objectivo deste estudo consistiu em fazer a caracterização molecular da CAH em doentes portugueses com suspeita de deficiência em 11ß-OH. Para esse efeito utilizaram-se amostras de ADN genómico de doentes diagnosticados clinicamente com CAH e procedeu-se à análise molecular do gene CYP11B1 baseada em PCR, DHPLC e sequenciação automática. Esta metodologia foi também utilizada na pesquisa de alterações em regiões reguladoras (promotor) do CYP11B1, nomeadamente nos locais Ad1, Ad4 e Ad5, bem como nas posições -1889 e -1859 que embora sejam locais polimórficos (SNPs), foram associados a uma diminuição da actividade enzimática da 11ß-OH. Concebeu-se ainda o desenho de um ensaio molecular com vista a permitir a detecção de quimeras resultantes de crossing-over desigual entre os genes CYP11B2 e CYP11B1. Foram encontradas alterações quer nas regiões codificantes quer nas regiões intrónicas. Todas as alterações encontradas consistiam em mutações pontuais, das quais algumas correspondiam a mutações silenciosas em sequências exónicas, outras eram alterações intrónicas (duas das quais com possibilidade de afectarem o splicing - IVS8+126C>G e IVS8+213T>C), duas correspondiam a mutações missense (p.Arg43Gln e p.Val378Met) e outra a uma mutação nonsense (p.Gln356X). No que diz respeito à região do promotor, não foi encontrada qualquer alteração nos locais Ad1, Ad4 e Ad5, o mesmo se tendo verificado no caso das posições -1889 e -1859 nas quais o nucleótido presente correspondeu sempre ao que não se encontra associado à redução da actividade enzimática
Description: Tese de mestrado, Biologia (Biologia Humana e Ambiente), 2008, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências
URI: http://catalogo.ul.pt/F/?func=item-global&doc_library=ULB01&type=03&doc_number=000561208
http://hdl.handle.net/10451/1238
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