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Título: Mecanismos de inactivação do gene LRP1B em tumores da tiróide
Autor: Torres, Joana Antunes
Orientador: Soares, Paula
Gomes, Rui Artur Paiva Loureiro
Palavras-chave: Biologia molecular
Tumores da tiróide
Inactivação Génica
Teses de mestrado
Issue Date: 2009
Resumo: Os tumores da tiróide são o tipo mais frequente de neoplasia endócrina e podem ocorrer na forma esporádica e familiar. O LRP1B é um potencial gene supressor de tumores cujo papel nunca foi investigado em tiróide. Os genes supressores de tumores podem ser inactivados por diversos mecanismos entre os quais mecanismos epigenéticos. A epigenética compreende um conjunto de mecanismos que regulam a expressão génica não envolvendo modificações na sequência nucleotídica. Os mecanismos epigenéticos envolvem metilação de DNA, modificações de histonas, RNAs não codificantes e posição do nucleossoma. O objectivo deste trabalho foi investigar, a nível molecular e funcional, os mecanismos epigenéticos de inactivação do LRP1B em linhas celulares e tumores da tiróide. Estudou-se o estado de metilação de um fragmento de 230pb da ilha CpG do LRP1B em 10 linhas celulares derivadas de carcinomas da tiróide e em tumores da tiróide (20 AFTs, 17 CFT, 24 CPT, 10 CAT e 12 CNMTF), por conversão de bissulfito seguido de sequenciação. Detectou-se metilação em 30% das linhas celulares e em 40% das lesões da tiróide. No entanto, nenhuma das tiróides normais estudadas revelou metilação da ilha CpG do LRP1B. Para avaliar a influência da metilação na expressão, realizaram-se tratamentos com agentes desmetilantes (5-Aza e siDNMT1). Observou-se re-expressão do LRP1B numa das linhas com metilação. Para investigar o papel da metilação de histonas, silenciou-se a HMT G9a (H3K9) através de siRNA, o que resultou na diminuição da expressão do LRP1B numa linha celular sem metilação de DNA. Em conclusão, encontrámos metilação do promotor do LRP1B especificamente em tumores da tiróide. Salienta-se a sua ausência total em amostras de tiróides normais. Elucidámos, em linhas celulares, alguns dos mecanismos de inactivação do LRP1B. Os nossos resultados sugerem a metilação do promotor do LRP1B como um biomarcador epigenético com elevada especificidade e baixa sensibilidade.
Thyroid tumours are the most frequent type of endocrine neoplasia and can occur in both sporadic and familial forms. LRP1B is a potential tumour suppressor gene and its role has never been adressed in thyroid. Tumour suppressor genes can be inactivated by a number of different mechanisms, namely epigenetic events. Epigenetics referes to the mechanisms that regulate gene expression without modifying the underlying DNA sequence. Some epigenetic mechanisms should be highlighted such as DNA methylation, histone modifications, non coding RNAs and nucleosome position. The aim of this work was to investigate the role of epigenetic events underlying LRP1B inactivation in both thyroid cell lines and tumours, using a molecular and functional approach. A 230bp fragment of LRP1B CpG island was studied in 10 thyroid carcinoma-derived cell lines and 83 thyroid tumours (20 FTA, 17 FTC, 24 PTC, 10 ATC and 12 FNMTC), using bisulfite conversion followed by sequencing. It was observed methylation in 30% of the cell lines and in 40% of the thyroid lesions. None of the normal thyroid samples revealed methylation in LRP1B CpG island. In order to evaluate the role of methylation in gene expression we performed a treatment with demethylating agents (5-Aza and siDNMT1). The treatment led to the reexpression in a cell line with DNA methylation. The role of histone methylation was assessed with the silencing of HMT G9a (H3K9) using siRNA leading to a decrease in LRP1B expression in one cell line without DNA methylation. In summary, we found DNA methylation in LRP1B promoter region in the studied thyroid tumours. However we did not find any DNA methylation in normal thyroid samples. We clarified some of the LRP1B inactivating mechanisms in cell lines. Our results suggest LRP1B promotor DNA methylation as an epigenetic biomarker with high specificity and low sensibility.
Descrição: Tese de mestrado, Biologia (Biologia Molecular Humana), 2009, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências
URI: http://catalogo.ul.pt/F/?func=item-global&doc_library=ULB01&type=03&doc_number=000576443
http://hdl.handle.net/10451/1797
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