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Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10451/5471

Título: Propriedades anti-inflamatórias de flavonóides: mecanismos de acção celular
Autor: Ramos, Catarina Cabrita
Orientador: Mira, Maria de Lurdes, 1949-
Palavras-chave: Inflamação
Flavonóides
HOCl
Neutrófilos
Células THP-1 e NF-κB
Teses de mestrado - 2009
Issue Date: 2009
Resumo: O ácido hipocloroso (HOCl) é um oxidante forte produzido por neutrófilos e monócitos activados. Esta espécie reactiva de oxigénio (ROS) é gerada a partir da reacção do H2O2 com o Cl, catalisada pelo mieloperoxidase e desempenha um papel fundamental no pro-cesso inflamatório. Embora a formação de HOCl tenha como finalidade matar os microor-ganismos invasores dentro do fagossoma, pode, também, ser libertado para fora da célula, onde pode lesar os tecidos e contribuir para a patogénese de doenças inflamatórias. Tor-na-se, assim, útil captar esta espécie oxidante, de modo a proteger os tecidos circundantes e avaliar o papel potencial de compostos antioxidantes na prevenção de lesões nos locais de inflamação. Considerou-se, por isso, ser importante estudar as propriedades anti-inflamatórias de alguns flavonóides (quercetina, fisetina, naringenina e naringina), em relação à captação de HOCl produzido quimicamente e gerado por neutrófilos activados ex vivo, bem como os seus efeitos na activação do factor de transcrição NF-κB. Em relação à captação de HOCl, para cada flavonóide foram determinados valores de IC50, determinados através de diferentes métodos de competição: oxidação do vermelho pirogalol (PGR), cloração da taurina e oxidação da sonda 3-aminofenilfluoresceína (APF) que foi seguida por espectrofluorimetria e citometria de fluxo. O flavonóide que apresentou melhor actividade foi a quercetina, uma vez que possui todas as características estruturais importantes que lhe permite ter um efeito protector em relação às reacções de cloração/oxidação mediadas pelo HOCl. A fisetina e a naringenina, ape-sar de não possuírem algumas das características estruturais importantes, que existem na quercetina, também, demonstraram uma elevada capacidade antioxidante, quando o HOCl era gerado por neutrófilos activados, o que poderá ser explicado pela sua maior lipofilicidade em comparação com a quercetina. Estudou-se, também, a capacidade dos flavonóides quercetina, fisetina e naringenina para induzirem variações na activação do NF-kB em células monocíticas THP-1 activadas por LPS. Através da análise por Western blot, observou-se que estes flavonóides exerciam efeitos inibitórios na activação do NF-kB. Esta resposta reflectia-se numa menor translocação da pro-teína p65 para o núcleo e numa menor degradação das proteínas inibitórias do NF-κB (IκB). Estes resultados sugerem que os flavonóides quercetina, fisetina e naringenina podem exercer efeitos anti-inflamatórios, através da inibição da activação do NF-κB e da captação de HOCl, um oxidante forte produzido pelos neutrófilos.
Hypochlorous acid (HOCl) is a powerful oxidant produced by stimulated neutrophils and monocytes. This reactive oxygen specie (ROS) is generated by the reaction of H2O2 with Cl-, catalyzed by myeloperoxidase (MPO), and has long been recognized to play an important role in the inflammatory process. Although this toxic specie is formed with the aim of killing the ingested microorganisms (inside the phagosome), it can also be released to the outside of the cell, where it may damage normal tissue and thus contribute to the pathogenesis of inflamma-tory diseases. Considering this fact, it should be useful to scavenge HOCl, in order to protect the nearby tissues and to evaluate the potential modulator role of antioxidant compounds in the prevention of tissue injury at sites of inflammation. Therefore it was considered of interest to study anti-inflammatory properties of some flavonoids (quercetin, fisetin, naringenin and naringin) towards the scaveging of hypochlorous acid (HOCl) chemically generated and by ex vivo activated human neutrophils, as well as their effects on the activation of the transcription factor NF-κB. For each flavonoid different IC50 values were obtained, when assessed through differ-ent competition methods: oxidation of pyrogallol red (PGR), taurine chlorination and oxidation of the probe 3-aminophenilphluorescein (APF), which was followed by spectrofluorimetry and flow cytometry. Quercetin was the studied flavonoid who presented the highest HOCl scavenging activ-ity, since this flavonoid possesses structural features that are determinant on the protection against HOCl mediated chlorination/oxidation reactions. Fisetin and naringenin, in spite of not possessing some of these structural features, also showed high antioxidant activity, when HOCl was generated by activated neutrophils. The lipophilicity of these compounds may be respon-sible for the behaviour of these flavonoids. We also examined the ability of the flavonoids quercetin, fisetin and naringenin to in-duce changes in the activation of NF-κB in THP-1 cells activated by LPS. Innibitory effects in the activation of NF-κB, analysed by Western blotting, were observed for the studied flavonoids. This response was reflected in terms of nuclear translocation of NF-κB and degradation of NF-κB inhibitory protein (IκB). Our results suggest that the flavonoids, quercetin, fisetin, and naringenin may exert anti-inflammatory effects through the inhibition of NF-κB activation and the scavenging of HOCl, a strong oxidant produced by phagocytic cells.
Descrição: Tese de mestrado, Bioquímica (Bioquímica Médica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2009
URI: http://hdl.handle.net/10451/5471
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